FISH 滤光片和滤光片组
姓名：刘工(Eden)
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荧光原位杂交 (Fluorescence In Situ Hybridization, FISH) 是指利用荧光染料标记的，已知序列的单链核酸作为探针，通过碱基互补配对原则，与待检样品中核酸进行特异性结合，然后通过观察荧光信号，从而对样品中待检核酸进行定性，定量及定位分析。FISH 具有快速，信号强，特异性高以及可以多重染色等特点，广泛应用于产前诊断，基因组结构分析等领域。
影响 FISH 结果的因素有很多，包括样品准备和处理，显微镜，光源，荧光探针以及滤光片。FISH 通常基于荧光显微镜来观测信号，所用滤光片包括激发片，二向色镜和发射片三种。其工作原理如下图所示：
激发片: 选择透过光源的某部分波段的光，用来激发荧光探针；
二向色镜: 反射光源的光至样品，透过产生的荧光并反射激发光的散射光；
发射片: 选择透过荧光的某部分波段的光至检 测器或人眼，并完全阻挡掉激发光的杂散光。
在 FISH 实验中，滤光片带宽的大小会对 FISH 图像的对比度产生重要的影响。增加带宽会提高激发和接收效率，使接收的信号增强。但实际接收的信号中同时包含了探针的荧光信号和样品的背底噪音，带宽的增加会同时增加这两者的强度。带宽减小，虽然可以降低背底噪音的强度，但荧光信号也会随之减弱 。所以对于对比度要求很高的 FISH 实验，针对于每种具体的染料，都会存在一个zui佳的带宽，使 FISH 图像能够达到zui佳的对比度。Chroma的FISH 滤光片的带宽都是根据常用的 FISH 染料做过优化，可以为用户的 FISH 实验提供zui佳的对比度的图像。
FISH 实验中的噪音主要来自三个方面：
(1) 细胞或组织的自发荧光;
(2) 试剂的自发荧光;
(3) 荧光探针的非特异性结合;
Chroma FISH 滤光片组具有以下特点:
·保证足够亮度的同时，提供zui佳的对比度；
·消除串色的影响；
a. 消除 Gold 和 Aqua 串色到 Green 通道；
b. 消除 Gold 和 Orange 串色到 Red 通道；
·对多波段滤光片组中的 DAPI 通道进行特殊处理，避免 DAPI 信号过强而将其他信号掩盖；
·多**像叠加零漂移；
·磁控溅射镀膜，终身质保。
FISH 单波段带通滤光片组：
滤光片组
激发片
CWL/FWHM
发射片
二向色镜
50% cut-on
FISH 探针
49000
350/50
460/50
400
DAPI
49028
395/25
425
**用于395nm 光源
49301
405/10
460/36
Spectrum Blue/ZyBlue
49302
436/20
480/30
455
Spectrum Aqua
49303
495/25
537/29
515
Spectrum Green/ZyGreen
**用于有Aqua，无 Gold 时
49308
485/25
525/30
505
**用于无 Aqua，有 Gold 时
49312
490/20
525/20
**用于有 Aqua，有 Gold 时
49304
546/10
572/23
556
SpectrumGold/ZyGold
49305
546/22
590/33
565
Spectrum Orange/ZyOange
**用于无 Red 时
49309
539/21
576/31
**用于有 Red 时
49306
580/25
625/30
600
Spectrum Red/ZyRed
**用于无 Gold，无 Orange 时
49310
592/21
630/30
610
**用于有 Gold，无 Orange 时
49311
599/13
632/28
612
**用于有 Orange 时
49307
630/20
667/30
647
Spectrum Far Red
49009
640/30
690/50
660
FISH 双波段带通滤光片组：
探针1
探针2
59001v2
Multi Band
394/30
483/26
443/36
527/40
420
502
Green
59002v2
544/30
462/35
590/41
430
566
Orange
59003v2
576/30
627/50
442
Red
59010
585/22
526/25
628/34
508
605
59011
560/25
521/34
606/40
503
585
59012
475/60
552/24
515/30
597/46
495
570
59033
535/25
480/23
580/30
462
558
Aqua
Gold
FISH 三波段带通滤光片组：
50%cut-on
探针3
69008
435/22
501/20
575/24
469/25
536/29
635/69
453
517
595
69011
434/21
498/20
566/28
468/22
530/25
610/40
514
588
69013v2
440/31
520/35
605/41
504
89084v2
Multi Band Ex1
Multi Band Ex2
Singe Band
69015
450/30
525/25
627/34
419
89085
Single Band
探针4
69014
387/10
432/25